近日，凯发k8分子细胞凯发k8卓越创新中心开发了高效的斑马鱼半克隆技术。

半克隆技术是独特的动物个体制备方法。斑马鱼作为研究脊椎动物发育与疾病的关键模式生物。目前，主流CRISPR受精卵注射编辑技术存在短板；获取纯合突变体耗时长且效果不佳；无法构建胚胎致死基因的稳定突变品系。因此，高效快速地制备基因编辑斑马鱼模型，一直是重要难题。

研究选用新鲜囊胚期单倍体细胞，获得可育的半克隆斑马鱼，优化技术后制备成功率提升至约30%。该技术依托单倍体囊胚细胞核移植技术，彻底消除嵌合现象，获得性状均一的半克隆鱼；在单倍体胚胎中进行多重基因编辑，可实现多基因编辑一步到位，获得多种基因型组合的供体细胞，并产生雌、雄半克隆斑马鱼，且经后续繁育即可在F1代直接得到基因纯合突变个体；结合PCR分析与囊胚细胞低温保存方法，可高效制备基因敲入斑马鱼；利用核移植—半克隆串联技术，提升基因编辑半克隆个体的制备效率。

这项研究通过联合应用囊胚细胞冷冻保存、供体细胞PCR预筛选及囊胚细胞核移植扩增等技术，使半克隆系统成为斑马鱼遗传分析的重要平台。

相关研究成果在线发表在《细胞研究》（Cell Research）上。研究工作得到国家重点研究计划等的支持。

论文链接

斑马鱼半克隆技术流程图